摘   要  家蚕是鳞翅目重要的模式生物，但是目前家蚕培养细胞系少，给家蚕基础研究带来不便，也影响了家蚕作为模式生物的应用。组织体外培养在一定程度上可以代表体内环境，且操作相对简单。我们尝试并建立了一种采用ＴＣ-１００ 培养基体外培养丝腺组织的方法，取健康家蚕５ 龄２ ｄ 的幼虫，用７５％乙醇进行表面消毒，灭菌水冲洗，剪开腹部表皮固定，用镊子轻轻拉出丝腺组织，用７５％乙醇快速漂洗、ＰＢＳ 缓冲液冲洗２ ～ ３ 次，放入含有８００ μＬＴＣ-１００ 培养基的１２ 孔细胞培养板的培养孔中，每孔４ 条丝腺组织，２７ ℃ 培养；将０. ６４ μｇ 增强荧光蛋白基因表达载体ｐｃＤＮＡ３.０［ｉｅ１ｅｇｆｐＳＶ４０］加入到２５ μＬ 不完全ＴＣ-１００ 培养基中孵育１５ ｍｉｎ 后转染丝腺组织，４８ ｈ 后用荧光显微镜观察，培养基清澈，丝腺组织外形完好、发出亮绿色荧光，表明ｅｇｆｐ 在丝腺中得到了表达。为进一步验证体外培养丝腺的转染效果，将家蚕ｍｉＲ００３１的抑制物（ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ）和阴性对照（ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ ｎｅｇｅｔｉｖｅ ｃｏｎｔｒｏｌ）各１０ μＬ 按照同样方法配成转染液，加入到放有丝腺组织的培养孔中，４８ ｈ 收集丝腺组织，提取总ＲＮＡ，荧光定量ＰＣＲ 检测靶基因ＢｍＦｉｂＬ 的表达量，结果显示，ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ 抑制ｍｉＲ-００３１的表达，促使ＢｍＦｉｂ-Ｌ 的表达量上升，表明用体外培养丝腺进行转染等试验是可行的。该方法的建立为研究蚕丝蛋白基因表达调控的分子机制提供新的技术途径，也为家蚕其他组织的体外培养和研究提供借鉴。
关键词  家蚕；丝腺；体外培养；转染；瞬时表达